我們在用ELISA顯色法測定乙肝五項的過程中,會不同程度出現(xiàn)假陽性的結果。經(jīng)過觀察與分析,總結了ELISA法測定乙肝五項中出現(xiàn)假陽性的幾種原因,來與科研工作者進行分享和探討,以便在未來工作中避免出現(xiàn)錯誤,提高我們的實驗效率和水平。
在一次檢測試驗中,我們發(fā)現(xiàn)所做乙肝五項的反應板都呈現(xiàn)藍色,經(jīng)過仔細查找原因,結果發(fā)現(xiàn),操作中將待顯色的反應板置于6%“84”消毒液剛擦拭過的桌面上,會使其反應結果均顯藍色。為進一步證實,我們便做了以下試驗。
1 材料
1.1 “84”消毒液購自上海利康消毒高科技有限公司。
1.2 乙肝五項ELISA試劑盒購自上海信然生物有限公司。
2 方法與結果
2.1 方法
將已知的HBsAg陽性、陰性和弱陽性的血清操作至顯色時,分為6組,分別于1min、5min、10min、15min、20min、25min加上顯色劑后,置于用6%“84”消毒液擦試過的桌面上(桌面上無明水,但有濕度)放置15min至25min觀察結果。當20min過后,我們發(fā)現(xiàn),其結果均呈藍色。
2.2 結果
將已知的HBsAg陽性標本操作至加顯色劑后分別加入不同濃度“84”消毒液5μl。隨“84”消毒液濃度減少其顯色逐漸呈:黃綠、棕紅、淡藍、藍色,至0.001%濃度無顏色改變。
3 討論
我們所用ELISA法中的“B”顯色劑,主要成份是四甲基聯(lián)苯胺(TMB),而酶標記物中的酶為辣根過氧化物酶。“84消毒液的主要成份為要效氯,分解后的游離氯能取代ELISA顯色劑B液(TMB)上的氫,使其呈藍色(鹵代反應),而高濃度的“84”消毒液呈酸性,可使TMB呈。
由此可見,當“84”消毒液在空氣中的濃度大于0.001%時,即可對ELISA法的顯色造成影響,使結果為假陽性。因此我們認為,“84”消毒液可對ELISA法所有以TMB做底物的試驗有影響。為找到有效的解決假陽性的辦法,我們打開門窗、換氣扇,工作人員的手和衣物均不接觸“84”消毒液,再把所有的標本重新洗滌5次,加上顯色劑,除弱陽性標本外,其余均與未被干擾結果相符。故被“84”消毒液影響的標本均應重做,以免影響結果。
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