更新時間:2021-09-02
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血清標本宜在新鮮時檢測
◆ 如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應。
◆ 如在冰箱中保存過久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。
◆ 一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存。
◆ 混勻器上強烈振蕩。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。
◆ 反復凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。
◆ 保存血清自采集時就應注意無菌操作,也可加入適當防腐劑。
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注意事項:
◆ 標本宜在新鮮時檢測,如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應。保存過久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。
◆ 凍結標本溶解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混合,不要在混勻器上強烈震蕩。
◆ 渾濁或有沉淀的標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。
◆ 反復凍融會使蛋白效價降低,所以代測樣本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。
◆ ELISA實驗標準曲線平直,一般有以下原因:標準曲線制備是否不當,洗孔不凈,吸孔不充分,讀數(shù)不準確或是吸量誤差。查找原因,即可找到相應解決方案。
實驗的基本操作流程:
A 包被ELISA板子或使用商品化ELISA板
B 讓標本中的抗原/抗體與固相載體上的抗體/抗原結合,形成固相復合物。
C 根據(jù)顏色反應的程度進行抗原/抗體的定性或定量。
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